包括标准曲线制作，绝对定量。如细菌总菌数绝对定量，特异性菌或基因的相对定量。
从样品制备，到DNA、RNA提取，质检，逆转，以及后期的数据分析，一条龙服务。
位于浙大华家池校区内，联系电话86971763,洪老师。或者来email：zjubell#hotmail.com
请将#换成@即可。
下图为三个复孔，10倍梯度稀释的扩增曲线以及标准曲线图。
扩增效率一般在95－105%之间，R方在0.99以上。

主要实验步骤如下 ：

1. 设计并合成Realtime PCR引物。也可以客户提供文献和引物，我们负责帮忙blast验证。
2. 引物条件的摸索及优化。
3. 客户样品RNA抽提
   实验对象为组织样品，取适量（50-100mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品加1ml的RNA抽提试剂Trizol（Invitrogen），匀浆后抽提RNA。
实验对象为细胞样品，每份样品取1×106～1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加1ml的Trizol（Invitrogen），裂解后抽提RNA
4. RNA质量检测 
a. 紫外吸收测定法测定RNA在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，以计算其浓度并评估RNA纯度
b. 使用agilent 2100 bioanalyzor，检测RNA纯度及完整性。电子形式，方便发表文章。如下图：




5. 使用逆转录酶进行反应，将样品RNA逆转录为cDNA。
6. 制备标准曲线样品：含有目的基因片段的质粒做标准品，10倍梯度稀释。做标准曲线，对该基因做绝对定量，对其他基因与他做相对定量。
7. 检测结果进行标准曲线分析：以对待测样品的目的基因进行定量。相对定量实验需要进一步用样品的目的基因测得值除以管家基因测得值以校正误差，所得结果代表某样品的目的基因相对含量。
8. 提供实验报告：包括详细的实验方法及实时荧光定量PCR实验结果的相关图表 

●实时定量PCR全套技术服务收费标准
☆实验步骤
组织或细胞RNA抽提 50－80元／样
RNA质量检测 50－70元／样
cDNA制备  150元(一个组织或细胞标本) 100元(大于10个组织或细胞标本)
目的基因实时定量PCR
看家基因实时定量PCR
标准曲线制备
数据分析   for free
其他的面议。