做细胞培养
最怕推开CO₂培养箱门的那一刻
“我的细胞怎么长这样了”
细胞培养是一段漫长的过程，而在这个过程当中，细胞的外观可能会发生一些变化，比如颗粒变多、细胞变圆、变大、变小、聚团、空泡等等。这些变化可能是正常现象，也可能是状态不好的细胞在向我们发出“求救”信号。
常见异常形态&快速诊断
- 科研人必看的细胞形态异常自救指南 -
1.颗粒增多、发黑、状态差
图片来源于网络
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细胞出现颗粒增多，或培养过程中显微镜观察发现小颗粒，可能为自噬产物或代谢副产物，也有可能是发生了微生物污染。
| 疑凶： 污染（细菌最常见！真菌、支原体）、细胞碎片、代谢废物堆积、pH 异常、营养不足 / 过期。
• 自救：
立即！镜下高倍镜找污染（细菌游动、真菌菌丝）。
怀疑污染：果断弃掉！彻底消毒环境。严格无菌操作复查。
非污染：清洗更换新鲜培养基、检查 CO₂浓度 / 培养基 pH、确认血清 / 添加剂是否失效或浓度错误。
2.细胞聚团
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细胞密度高时聚集形成紧凑群体，可能由低温、剧烈震荡或血清不合适引发。
| 疑凶：细胞-基质粘附缺陷、消化过度（胰蛋白酶活性过强）、钙离子浓度异常或支原体污染。
• 自救：
消化要充分：如果细胞没消化开（成团贴壁），别急。继续培养24小时让细胞恢复，然后重新消化传代就行。下次记得多消化一会儿，并且传完后务必在显微镜下看一眼，确认细胞是分散的单细胞状态。
勤快：细胞长满了还不传代，长时间挤在一起，就容易结成很硬的团。这种团传代时很难弄散，传下去还会长出来。所以平时要勤快点看细胞密度，除非实验需要长满，一般长到80%左右（快满但没满）就得传代了。
本身特性：像NK-92、Jurkat这类细胞，它们本来就是聚在一起长的，这是正常现象，可别当成消化或培养出问题了。
3.空泡化
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细胞出现空泡化，通常是细胞受到损伤，药物刺激，培养基成分不对，培养温度、气相等不合适的情况都可能导致空泡。
| 疑凶：药物 / 毒素作用、代谢异常（如糖原累积）、某些病毒感染、支原体污染、血清问题。
• 自救：
排除药物因素：是否刚加了处理？降低浓度 / 时间试试。
检查血清：换一批次或来源的优质血清。
排查支原体：做支原体检测！这是常见隐形杀手。
4.生长缓慢甚至停滞
| 疑凶： 血清质量差 / 浓度低、传代比例过高、细胞老化、营养耗尽、轻微污染（如支原体）、培养箱条件不佳（温度 / CO₂）
• 自救：
检查基础：确认血清批次、浓度；确认传代时细胞密度是否合适（接种密度过低？）。
优化环境：校准培养箱温度、CO₂浓度和湿度（尤其水盘）。
检测支原体
考虑复苏新批次低代次细胞
5.细胞皱缩
贴附能力较弱的细胞系（像293）在培养器皿表面附着不牢固，受外力震荡时易发生收缩
| 疑凶： 低温敏感，外力震荡
• 自救：
通常，将其放回培养箱静置即可恢复原有状态。但若长时间静置（如过夜）后细胞仍呈皱缩状，则需重新进行消化处理。
6.细胞拉伸/纤维化
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细胞边缘出现溃烂、长角或毛刺
| 疑凶： 细胞受到损伤或细胞生长特性，生长速度有关。
• 自救：
提升血清浓度至标准值（胎牛血清10-20%）
基质再包被
检测细胞代次（超过代次需复苏新批次）
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